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Generika Viagra

die Vanadat komplexe Kristall Bau von Leishmania donovani Topoisomerase AbstractFrom I, mehrere Aminosäurereste beteiligt zu werden in der katalytischen Reaktion werden passieren Verbindung gebracht. Trotz der Tatsache, dass einige Prognosen und Vorschläge erzeugt werden passieren, die genaue Funktion der Aminosäuren, nicht aber in vitro eindeutig gezeigt. Unter diesen Resten, Lysin 352 und Arginin 314 Stand als potenzielle Kandidaten für die Generika Viagra Teilnahme an dem Teil einer gemeinsamen Säure für die Dauer der Teilungsstadium nehmen. In diesem Bericht haben wir den Teil von Lysin 352 um die massive Untereinheit, gekennzeichnet durch den Internet-gerichtete Mutagenese und haben auch die allgemeine Säure zu erkennen versucht, die die fünf Atom am Verlassen Strang protonieren wird. Studien, die die mutierten Enzyme zeigen, dass, Rest Übung ernsthaft beeinträchtigt wurde, als Lys352 mutiert war zu Arginin oder Alanin (K352R oder K352A). Die Mutation von Arg314 in Lys (R314K) hat sehr kleinen Einfluss auf die Entspannung Aktion. In der Tiefe untersuchen zeigt, dass sich jede Spaltung und Religation Methoden stark in Situation beeinflusst von K352R und K352A und auch die Spaltung Religation Gleichgewicht in Richtung der Spaltung verschoben. Auf der gegenüberliegenden, zeigt die R314K Mutante nur etwas langsamer Preis der Spaltung im Vergleich zum Wild Vielfalt Enzym. Die Spaltung Assays durch ein Oligonukleotid aufweist, die 5 phosphorthiolat Show enthält, die Lys352 wirkt wie eine allgemeine Säure im Inneren des Spaltungsschritt. Komplett, stellt diese Studie die unverzichtbare Funktion von Lysin 352 in der katalytischen Reaktion von L. donovani Topoisomerase I. zwei. Die Komponenten und methods2.one. Materialien [32P] ATP (6000 Ci / mmol) wurde von Amersham erworben (Oakville, Ont.). [14C] CDP (380 mCi / mmol) wurde von Moravek Biochemicals (Brea, CA) erworben. Endoproteinase Asp N wurde von Boehringer Mannheim erhalten (Laval, Que.). Oligonukleotidprimer wurden von Generika Viagra kanadischen Life Systems synthetisiert (Burlington, Ont.). Umgehen Thermal Cycle-Sequencing-Reagenzien wurden von New England Biolabs erhalten (Mississauga, Ont.). Peptide hatte auf einem Peptid-Synthesizer (Modell 431A, Verwendetes Biosystem) bereit gewesen. Die p34cdc2 Proteinkinase wurde aus Nocodazol verhaftet humanen Jurkat-T-Zellen unter Verwendung von 15 Ammoniumsulfat-Fraktionierung durch Generika Viagra Gelfiltration auf Sephacryl S 300HR (Pharmacia, Baie d Que.), Dann durch Ionen Handel angenommen hochgereinigtem auf DEAE Sephacel (Pharmacia), Econo Q ( Bio Rad, Mississauga, Ont.) und schließlich Econo S (Bio Rad) [15]. P34cdc2 wurde überwacht Kinaseaktivität mit einem synthetischen Peptidsubstrat (Gln Leu Gln Leu Gln Ala Ala Ser Asn Phe Lys Ser Val Lys Thr Fach Ile Arg) durch Testen wie vorstehend erläutert [16]. Die Anwesenheit von p34cdc2 Kinase in lebhaften Fraktionen wurde auf Immunblots mit Antikörpern gegen ein C-terminales Peptid von p34cdc2 Kinase [16] erstellt verifiziert. Das gereinigte Material erfahren eine bestimmte Aktion von 0,33 mol / min / mg, wenn sie bei 30 EINSATZ von Histon H1 (Boehringer Mannheim) als Substrat untersucht. Gereinigtes lebendige p34cdc2 Proteinkinasen wurden auch von Upstate Biotechnology (Lake Placid, NY) erreicht, Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA) und New England Generika Viagra Biolabs. Schlanke Schicht-Chromatographie (TLC) Platten für Phosphopeptid Kartierung wurden von Merck (Darmstadt, Deutschland) gekauft. Die große Untereinheit der Ribonukleotidreduktase (R1) in Enzymwirkung Assays verwendet wurde freundlicherweise von Dr. Harvey Rubin [20] zur Verfügung gestellt.
 

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